影響 PCR 體系蒸發的三大因素在這里，戳！

其實，造成這些結果的原因有很多，例如引物質量不佳、模板質量不好、退火溫度不合適等，但還有一個不容忽視的問題——PCR 體系蒸發。

聚合酶鏈式反應（PCR）需要依賴 PCR 儀對各反應階段的溫度和加熱時長進行控制，整個 PCR 反應通常需要經過 20～40 次加熱、冷卻的溫度循環，這個過程帶來的反應如試劑蒸發和損失，對許多 PCR 實驗結果影響顯著，在檢測靈敏度高的 qPCR 實驗中還影響透光性，從而導致結果不準確。

那么，影響 PCR 體系蒸發的因素都有哪些呢？

1、熱蓋壓力、溫度

為了防止 PCR 高溫反應中試劑向上揮發，PCR 儀一般通過在試液孔板上方覆蓋熱蓋單元，以上方高溫來減少試劑的揮發。但熱蓋能完美解決蒸發問題嗎？

PCR 儀的熱蓋大致可以分為以下四種：非可調式熱蓋、可調節式熱蓋、自適應式熱蓋和自動式熱蓋。而「可調節式熱蓋」利用手擰壓緊式，擰不緊會發生試劑蒸發，一些廠家通過增加熱蓋壓力以減少邊緣蒸發，但該方法并不能完全消除這一現象，有時擰得過緊反而可能出現壓壞管子、擰壞旋鈕的情況，有的儀器甚至會因擰得過緊而導致試劑蒸發。也有一些廠家通過在熱蓋上增加軟性導熱材料來解決這一問題，但目前，軟性導熱材料的使用壽命無法明確。

通常，采用電動智能熱蓋，能夠自動感應不同高度的耗材，自動壓緊耗材，壓力均勻且恒定，從而能夠減少試劑蒸發和人工誤差，提高實驗準確度和可重復性。

2、耗材形變

盡管目前通過熱蓋技術大大防止了體系蒸發，但在反應溶液的總體積僅有 3～5 μL 的情況下，由蒸發帶來的影響依然十分顯著。

PCR 孔板通常為塑料材質，在受熱后發生膨脹，產生較大地變形，用于放置 PCR 孔板的 PCR 金屬基座則受熱膨脹率極小，如圖所示，PCR 孔板受熱膨脹后不能正常沿平面延展進而中間形成拱起狀態，從而造成上方熱蓋不能全面地與 PCR 孔板上表面充分接觸，造成溫度、壓力不均，引起 PCR 孔板邊緣試劑的蒸發，影響 PCR 檢測效果。

3、耗材密封不嚴

熱蓋與耗材壓緊并不等于蓋緊了 PCR 管蓋，PCR 孔板質量參差不齊，一些孔板的蓋子本身密封不嚴，即使使勁蓋，也沒有用。同時，開關蓋過程繁瑣，有時還會造成漏液、氣溶膠污染。